分类: 医学、药学 >> 基础医学 提交时间: 2017-12-07 合作期刊: 《南方医科大学学报》
摘要: 目的明确TOLL样受体2(TLR2)与mioroRNA144(miR-144)作用之间的关系。方法利用不同浓度的miR-144的模拟物(mimics)和抑制剂(inhibitor)瞬时转染大鼠巨噬细胞系NR8383细胞,RT-qPCR检测miR-144和TLR2及其下游分子TNF-α的表达。利用大鼠肝脏。DNA为模板,PCR获取目的片段(即含miR-144野生及突变结合位点的TLR2 mRNA的3'UTR区);用Sac I ,xha I双酶切pmirGLO报告基因载体和含miR-144野生及突变结合位点的TLR2 mRNA的3'UTR区,构建携带上述片段的双荧光素酶报告基因,并通过PCR、双酶切、DNA测序鉴定构建的重组质粒,即emir-TLR2-3'UTR及emir-mutant-TLR2-3'UTR;并用miR-144的mimics与双荧光素酶报告基因共转染明确miR-144与TLR2mRNA的3'UTR区的靶向关系。结果瞬时转染100 nmol/L miR-144 mimics后,NR8383细胞中miR-144表达显著升高,而TLR2及其下游分开TNF-a寻r达显著下降;而100 nmol/LmiR-144 inhibitor作用则相反。PCR和双酶切DNA测序结果证实emir-TLR2-3'UTR及emir-mutant-TLR2-3'UTR重组载体构建成功;用100 nmol/L miR-144 mimics与空载体及上述两个构建体分别共转染HEK 293T细胞后,emir-TLR2-3'UTR转染组相对荧光素酶活性显著降低。结论miR-144通过靶向结合TLR2 mRNA的3'UTR区负性调节TLR2及其下游促炎因子的表达。